Эффективность перорального приёма плазмалогена Tamotsu (Тамоцу)

Эффективность перорального приёма плазмалогена Tamotsu (Тамоцу) и изменение его содержания в крови у пациентов, страдающих болезнью Альцгеймера в лёгкой стадии и умеренными когнитивными нарушениями: двойное слепое рандомизированное многоцентровое плацебо-контролируемое исследование. 

Исследовательская работа

Оглавление доступно на сайте ScienceDirect
EbioMedicine
Главная страница журнала: www.ebiomedicine.com 

Такехико Фудзино ^а, Тацуо Ямада ^b, Такаси Асада ^c, Ёсио Цубои ^d, Тикако Вакана^e, Сиро Маватари^a, Суминори Коно ^f

a)Институт реологических свойств питания, 2241-1 Кубара, Хисаяма-мати, Касуя-гун, Фукуока 811-2501, Япония

b) Реабилитационная клиника Готанды, 8-8-20 Нисиготанда, Синагава-ку, Токио 141-0031, Япония

c) Клиника памяти Отяномидзу, 1-5-34, Юсима, Бункё-ку, Токио 113-0034, Япония

d) Отделение неврологии, факультет медицины, Университет Фукуока, 7-45-1 Нанакума, Дзёхнан-ку, Фукуока 814-0180, Япония

e) Клиника BOOCS, 6-18 Тенямати, Хаката-ку, Фукуока 812-0025, Япония

f) Национальный институт здоровья и питания, Национальные институты биомедицинских инноваций, здоровья и питания, 1-23-1 Тояма, Синдзюку-ку, Токио 162-8636, Япония

ИНФОРМАЦИЯ О СТАТЬЕ

История статьи:

Получена 22 декабря 2016 г.

Получена в исправленной форме 6 февраля 2017 г.

Принята 13 февраля 2017 г.

Доступна онлайн с 24 февраля 2017 г.

РЕФЕРАТ

Краткий обзор: По имеющимся сведениям, количество плазмалогенов (Пл) в мозгу и крови умерших пациентов, страдавших болезнью Альцгеймера, уменьшалось. Недавно мы провели исследование, показавшее, что интраперитонеальный приём Пл вызывает улучшение когнитивной функции у подопытных животных. В ходе рассматриваемого исследования мы оценили эффективность перорального приёма Пл из морского гребешка в отношении когнитивной функции и изменения содержания Пл в крови у пациентов, страдающих болезнью Альцгеймера (БА) в лёгкой стадии и умеренными когнитивными нарушениями (УКН).

Методы: Двойное слепое рандомизированное многоцентровое плацебо-контролируемое исследование проводилось в течение 24 недель. В нём участвовали 328 пациентов в возрасте 60-85 лет с оценкой 20-27 баллов по Краткой шкале оценки психического статуса в Японии (MMSE-J) и пять и ниже баллов согласно краткой японской версии гериатрической шкалы депрессии (GDS-S-J). Испытуемые были случайным образом разделены на две группы: в одной группе пациенты принимали по 1 мг Пл из морского гребешка в сутки, в другой группе пациенты получали плацебо. Распределение по группам было скрыто от пациентов и врачей-исследователей. Первичным результатом являлась оценка по шкале MMSE-J. Вторичные результаты включали оценку по обновлённой шкале памяти Векслера (WMS-R), оценку по шкале GDS-S-J и уровень концентрации фосфатидилэтаноламинов плазмалогенов (ПлФЭ) в мембранах эритроцитов и плазме. Данное исследование зарегистрировано в Сети медицинской информации больниц при университетах за номером UMIN000014945.

Результаты: 276 пациентов из 328 испытуемых прошли исследование до конца (140 человек из лечебной группы и 136 человек из контрольной группы). В результате анализа в соответствии с намерением применить вмешательство, где рассматривались результаты пациентов, страдающих как БА в лёгкой стадии (20 ≤ MMSE-J ≤ 23), так и УКН (24 ≤ MMSE ≤ 27), не было обнаружено значительных различий между лечебной и контрольной группами в отношении первичных и вторичных результатов, в обеих группах отсутствовали тяжёлые побочные явления. Показатель WMS-R значительно улучшился в лечебной группе, а межгрупповая разница была близка к значимой (P = 0,067). Как показал анализ данных в подгруппе пациентов с БА в лёгкой стадии, показатель WMS-R значительно улучшился у женщин и всех испытуемых старше 77 лет в лечебной группе, а межгрупповая разница была статистически значимой у женщин (P = 0,017) и испытуемых моложе 77 лет (P = 0,029). У пациентов с БА в лёгкой стадии было выявлено значительно большее снижение количества ПлФЭ в плазме в контрольной группе по сравнению с лечебной группой.

Интерпретация: Пероральный приём очищенного Пл из морского гребешка способствует улучшению когнитивных функций у пациентов, страдающих БА в лёгкой стадии.

© 2017 г. Авторы. Опубликовано издательством Elsevier B.V. Данная статья находится в свободном доступе по лицензии CC (Creative Commons) BY-NC-ND.

(http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/)

Ключевые слова:

Плазмалоген, Морской гребешок, Болезнь Альцгеймера, Умеренные когнитивные нарушения, Когнитивная функция

1. Введение

Болезнь Альцгеймера (БА) — это возрастное нейродегенеративное заболевание, которое становится всё более распространённым по мере увеличения продолжительности жизни людей. Согласно прогнозам, распространённость БА может превысить 74 миллиона случаев по всему миру к 2030 году (World Alzheimer Report, 2015 г.). Причина и механизм БА до конца не выяснены, однако её нейропатологическим признаком является постепенное отложение бета-амилоидов и тау-белков. С другой стороны, тесная взаимосвязь между плазмалогенами (Пл) и БА подтверждена данными наблюдений, указывающими на уменьшение количества фосфатидилэтаноламинов плазмалогенов (ПлФЭ) в повреждённых участках головного мозга, таких как гиппокамп и лобная кора, у пациентов с БА (Гинсберг и др., 1995 г.; Гуан и др., 1999 г.; Хан и др., 2001 г.). Имеются данные о снижении уровня ПлФЭ в крови и спинномозговой жидкости пациентов с БА (Гооденове и др., 2007 г.; Вуд и др., 2010 г., 2015 г.; Ома и др., 2012 г.; Ямасита и др., 2015 г.). Однако остаётся неясным, является ли уменьшение количества Пл в мозговой ткани и плазме причиной или следствием данного заболевания. Последние исследования БА с участием животных моделей, проведённые нашей группой, показали, что интраперитонеальный приём очищенных Пл вызывает улучшение когнитивной функции (Катафути и др., 2012 г.; Хоссейн и др., 2013 г., 2016 г.).

Пл представляют собой особый класс глицерофосфолипидов, характеризуемых наличием винилэфирной связи в позиции sn-1 глицеринового скелета. Их также называют плазменил-фосфолипидами или алкенил-акрил-фосфолипидами. Они содержатся практически во всех тканях млекопитающих и составляют около 18-20% от общего количества фосфолипидов в клеточных мембранах. Преобладающими Пл в тканях млекопитающих являются ПлФЭ и холин-плазмалоген. ПлФЭ является намного более распространённым, чем холин-плазмалоген, за исключением сердца и скелетных мышц. По имеющимся сведениям, Пл в большом количестве содержатся в головном мозге, сетчатке глаза, лейкоцитах (иммунных клетках), сперме, сердце и скелетных мышцах млекопитающих. Это типичное распределение Пл указывает на важность Пл для млекопитающих (Фаруки и Хоррокс, 2001 г.; Брейверман и Мосер, 2012 г.).

Пл не только являются структурным компонентом клеточных мембран животных и хранилищем для вторичных мессенджеров, но также могут участвовать в слиянии мембран, переносе ионов и оттоке холестерина, а также действовать в качестве антиоксидантов в клеточных мембранах. Недавно сообщалось об ингибирующем воздействии Пл на гамма-секретазу (Онодера и др., 2015 г.). Цель настоящего исследования — оценить, приводит ли пероральный приём Пл, экстрагированных из морского гребешка, к улучшению когнитивной функции у пациентов, страдающих БА в лёгкой стадии и умеренными когнитивными нарушениями (УКН).

2. Методы

2.1. План и участники исследования

Настоящее исследование представляет собой двойное слепое рандомизированное многоцентровое плацебо-контролируемое исследование для оценки эффективности улучшения памяти плазмалогенами из морского гребешка у пациентов с БА и УКН. Период исследования включал 24-недельный период приёма и четырёхнедельный послелечебный период без приёма (всего 28 недель).

Испытуемыми были пациенты с оценкой 20-27 баллов по Краткой шкале оценки психического статуса в Японии (MMSE-J), т.е. пациенты, страдающие БА в лёгкой стадии (20 ≤ MMSE-J ≤ 23) или УКН (24 ≤ MMSE ≤ 27) (Сольфрицци и др., 2004 г.). Все пациенты должны были соответствовать критериям для БА в лёгкой стадии или УКН, указанным в пятом издании Диагностико-статистического руководства по психическим расстройствам (DSM-V). Отсутствие артериосклеротического слабоумия у пациентов было подтверждено посредством МРТ- или КТ-сканирования, проведённого не менее полугода назад. С целью исключения псевдодеменции было проверено и подтверждено, что пациенты имеют оценку пять или менее баллов согласно краткой японской версии гериатрической шкалы депрессии (GDS-S-J). В течение последних трёх месяцев режим пациентов, принимающих лекарства от болезни Альцгеймера, не изменялся. Все лица, ухаживающие за больными, были обязаны сопровождать их во время всех посещений на протяжении исследования и сообщали информацию о повседневной жизни пациентов и их самочувствии. Пациенты исключались из исследования в случае аллергии на морской гребешок, являющийся сырьём для исследуемого вещества. Было получено письменное осознанное согласие пациентов или их опекунов на данное исследование. Протокол исследования был утверждён Экспертными советами Больницы при университете Фукуоки (Фукуока), клиники Nihonbashi Sakura («Нихонбаси Сакура») (Токио) и клиники BOOCS в Фукуоке (Фукуока). Исследование было проведено в соответствии с Хельсинкской декларацией.

2.2. Слепой отбор и маскировка

Эксперт компании CAC Croit Corporation («Си-Эй-Си Круа Корпорэйшн») (Токио) выдал сформированный компьютером, произвольный список распределения на основании метода блочной рандомизации, где каждый блок состоял из двух мест в группе приёма плацебо и двух мест в группе приёма Пл. Во все центры исследования были доставлены наборы с исследуемым веществом, пронумерованные согласно списку распределения. Они были пациентам лично в руки. В некоторых центрах исследования, где отсутствовали холодильники, пациенты ежемесячно получали наборы для испытания курьерской почтой. Таким образом, вовлечённым пациентам был случайным образом предписан приём 1,0 мг Пл/день или плацебо. Исследуемое вещество имело желеобразную консистенцию. Активное вещество и плацебо были идентичны по внешнему виду и вкусу. Распределение по группам было скрыто от пациентов, опекунов, лечащих врачей и медицинских сотрудников на протяжении периода исследования. 

2.3. Процедуры

Пациенты-участники исследования получали исследуемое вещество во время визита исходного уровня или через неделю после визита исходного уровня и получали указание принимать его перорально дважды в день в течение 24 недель. Они получали исследуемое вещество с запасом на месяц вперёд на случай пропуска следующего запланированного визита. Для подтверждения соответствия они были обязаны возвратить неиспользованное исследуемое вещество во время следующего визита. Пациентов-участников также просили по возможности не изменять свой режим в течение периода исследования. Если пациент изменял режим приёма своего лекарства, наблюдение за ним/ней прекращалось. Во время каждого визита мы фиксировали все осложнения и нежелательные явления, о которых сообщали пациенты.

Первичной конечной точкой исследования была оценка MMSE-J. Вторичные конечные точки исследования включали оценку по обновлённой шкале памяти Векслера (WMS-R), оценку по шкале GDS-S-J, уровень концентрации ПлФЭ в плазме и относительная концентрация ПлФЭ в мембранах эритроцитов, а именно процентная доля Пл по отношению ко всем фосфолипидам в мембране эритроцита. Когнитивная функция оценивалась на исходном уровне, а затем на 12-ой, 24-ой и 28-ой неделях. Забор крови у пациентов проводился натощак на исходном уровне, а затем на 8-ой, 16-ой, 20-ой, 24-ой и 28-ой неделях для измерения содержания ПлФЭ в эритроцитах и плазме. Измерение содержания ПлФЭ производилось с использованием ранее применявшегося метода (Маватари и др., 2007 г., 2016 г.).

Оценка безопасности осуществлялась путём фиксирования нежелательных явлений, а также медицинского осмотра и биохимических анализов крови, в том числе для оценки функции печени, почечной функции, уровня сахара в крови и уровня содержания липидов, во время каждого визита.

2.4. Статистический анализ

Чтобы определить объём выборки, мы предположили, что оценка по шкале MMSE-J улучшится на 5% в контрольной группе и на 10% в лечебной группе при среднем отклонении 15% в обеих группах. При статистической мощности 0,80 и уровне значимости для одностороннего критерия 0,01 требуемый объём выборки составил 181 пробу в каждой группе. Было решено установить целевое количество образцов равным 200 в каждой группе с поправкой на долю испытуемых, которые могут выбыть из исследования.

Разница между условиями испытания оценивалась с использованием критерия Стьюдента для одной выборки, а внутригрупповые изменения с исходного уровня оценивались с применением двустороннего критерия Стьюдента. Что касается результатов для когнитивной функции после лечения, указывались средние изменения по сравнению с исходным уровнем и 95-процентный доверительный интервал (ДИ). Анализы проводились с использованием программного продукта Stata версии 13 (StataCorp, College Station, TX). Данное исследование зарегистрировано в Сети медицинской информации больниц при университетах за номером UMIN000014945.

2.5. Роль источника финансирования

Компания B&S Corporation Co. Ltd. (Токио), одна из организаций, финансирующих Японское общество исследования плазмалогена, участвовала в доставке исследуемого вещества и плацебо в центры исследования, но не принимала участия в планировании исследования, подготовке исследователей, анализе данных, интерпретации результатов и написании отчёта. Соответствующий автор имел полный доступ ко всем данным исследования и нёс окончательную ответственность за решение о передаче сведений для публикации. Все соисследователи также имели полный доступ к указанным данным. 

3. Результаты

3.1. Участники исследования

Всего к участию в исследовании были привлечены 328 пациентов из 25 больниц и клиник в регионах Кюсю, Канто и Кансай в период с 15 ноября 2014 г. по 8 октября 2015 г. Они были случайным образом распределены по двум группам (166 испытуемых в группе приёма Пл и 162 пациента в группе приёма плацебо). Из 328 зарегистрированных пациентов 285 участвовали в исследовании в течение 12 недель, 276 испытуемых прошли 24-недельный период исследования. Среди испытуемых, прошедших исследование, были 11 пациентов (4,0%), которые использовали не более 80% предоставленного исследуемого вещества. На рис. 1 показана схема исследования. 

Не было отмечено значительных различий между группами в отношении возраста, оценок MMSE-J, GDS-S-J, WMS-R (0 мин), WMS-R (30 мин), содержания ПлФЭ в эритроцитах и плазме на исходном уровне, однако соотношение мужчин и женщин было значительно ниже в контрольной группе (Таблица 1).

3.2. Клиническая эффективность

3.2.1. Первичный анализ

В анализе в соответствии с намерением применить вмешательство не было обнаружено значительного различия между лечебной и контрольной группами по первичным и вторичным результатам для когнитивной функции. Показатель MMSE-J показал почти значимое улучшение в лечебной группе, в то время как подобного улучшения не наблюдалось в лечебной группе, в соответствии с чем межгрупповая разница не была статистически значимой. Показатели WMS-R (0 мин) и WMS-R (30 минут) значительно улучшились в обеих группах, однако статистически значимая межгрупповая разница отсутствовала. Содержание ПлФЕ в эритроцитах и плазме снизилось в разной степени после лечения в обеих группах. Отсутствовала статистически значимая межгрупповая разница в любой момент времени, при этом количество ПлФЭ в плазме уменьшилось в большей степени в контрольной группе (Таблица 2). 

3.2.2. Анализ подгрупп

Мы изучили изменение когнитивной функции у пациентов, страдающих БА в лёгкой степени и УКН, по отдельности. Показатель MMSE-J не изменился значительно ни в одной из групп. Показатели WMS-R (0 мин) и WMS-R (30 мин) улучшились статистически значимо в лечебной группе, и улучшение оказалось более заметным в лечебной группе в отношении значения для 0 мин (P = 0,067) и значения для 30 мин (P = 0,078) (Таблица 3).

3.2.3. Анализ подгрупп по полу и возрасту

Далее, мы проанализировали когнитивную функцию у пациентов с БА в лёгкой степени по полу и возрасту (Таблица 4). Пациенты, страдающие БА в лёгкой степени, были разделены на две группы на основании медианта — 77 лет или младше и 78 лет или старше. У пациентов в возрасте 77 лет и младше показатель WMS-R (30 мин) увеличился статистически значимо в лечебной группе при значимой межгрупповой разнице (P = 0,029). У испытуемых женщин, страдающих БА в лёгкой степени, показатель WMS-R (30 мин) увеличился статистически значимо в лечебной группе при значимой межгрупповой разнице (P = 0,017). Отсутствовала значительная межгрупповая разница в анализе пациентов, страдающих УКН, по полу и возрасту.

3.2.4. Изменения количества плазмалогенов в крови

Были изучены изменения содержания ПлФЭ в крови у пациентов, страдающих БА в лёгкой стадии (Таблица 5). Уровень ПлФЭ в плазме снизился в контрольной группе со значимой межгрупповой разницей (P = 0,016). Наблюдалось статистически значимое повышение уровня ПлФЭ в эритроцитах на 16-ой неделе в лечебной группе и на 24-ой неделе в контрольной группе. Тем не менее, изменения между двумя группами не отличались значительно. 

3.3. Клиническая безопасность

В Таблице 6 обобщаются нежелательные явления. Между двумя группами отсутствовала значительная разница по частности нежелательных явлений. 

4. Обсуждение

Насколько нам известно, настоящее исследование является беспрецедентным исследованием влияния перорального приёма Пл на когнитивную функцию у пациентов, страдающих БА в лёгкой стадии и УКН. Текущие результаты не показали значительной разницы первичных результатов (оценка MMSE-J) между лечебной и контрольной группами. Однако среди пациентов с БА в лёгкой стадии оценка MMSE-J значительно улучшилась в лечебной группе, и это улучшение выглядит более существенным, чем в контрольной группе. В анализе по подгруппам пациентов с БА в лёгкой стадии улучшение показателя MMSE-J было более заметным у женщин-пациенток и пациентов младше 77 лет. Эти результаты свидетельствуют о том, что пероральный приём очищенных Пл может оказать способствовать улучшению функции памяти у пациентов, страдающих БА в лёгкой стадии. Данное исследование не даёт результатов в пользу эффективности Пл для пациентов с БА в лёгкой стадии старше 78 лет или мужчин-пациентов. Низкая эффективность в этих случаях может объясняться возрастными необратимыми дегенеративными изменениями в головном мозге (Коу и др., 2011 г.). Неизвестно, почему эффективность была очевидна в отношении женщин в отличие от мужчин.

Данное исследование не выявило эффективности Пл в отношении пациентов, страдающих УКН. Следует отметить, что оценка по шкале WMS-R значительно улучшилась ещё в конце исследования (24-ая неделя) и в контрольной группе. Эти результаты говорят о том, что у пациентов, страдающих УКН, эффект плацебо мог проявиться сильнее, чем у пациентов с БА в лёгкой стадии. У пациентов с УКН могут сохраняться такие высшие функции мозга, как ожидание и надежда. Вероятно, пациенты с БА в лёгкой стадии меньше подвержены эффекту плацебо, поскольку их когнитивная функция ухудшается и вышеупомянутая высшая функция мозга ослабляется более заметно, чем у пациентов с УКН. Данная цепь предположений указывает на то, что психическое состояние человека может вызывать изменения концентрации Пл в тканях головного мозга.

Наши предыдущие исследования показали, что количество Пл в мембранах эритроцитов значительно увеличивается при пероральном приёме Пл, ещё одно исследование также показало, что количество ПлФЭ в плазме увеличивалось вскоре после их перорального приёма (Маватари и др., 2012 г.; Нисимукаи и др., 2003 г.). Однако в настоящем исследовании приём лишь очищенных Пл по 1,0 мг/день оказал эффект на функцию памяти у пациентов с БА в лёгкой стадии. Физиологический механизм данного эффекта при столь малом количестве Пл, принимаемом перорально, не ясен. Одна из гипотез состоит в том, что Пл могут проникать через определённые рецепторы, как гормоны. Считается, что липидные рафты клеточной мембраны связаны с сигнальной системой клетки (Хоссейн и др., 2016 г.; Нью и Вонг, 2007 г.). Имеются сведения о том, что липидные рафты содержат большое количество ПлФЭ (Пайк и др., 2002 г.). Рецепторы, сопряжённые с G-белком (GPRC), также сконцентрированы в липидных рафтах и ямках (Кини и Паренти, 2004 г.). Это указывает на вероятность того, что Пл действуют как лиганды GPRC. Уровень концентрации ПлФЭ в плазме крови человека достигает около 100 мкмоль/л, однако Пл могут циркулировать в плазме в виде липопротеинов. Пл в липопротеинах обычно не действуют в качестве лиганд рецепторов. Однако вполне возможно, что свободные Пл, полученные пероральным путём, даже в небольших количествах, могут действовать в качестве лиганды некоторых рецепторов в клетках кишечника перед превращением в липопротеины. Хорошо известно, что существует тесная связь между кишечником и головным мозгом посредством нейронных, эндокринных и иммунных проводящих путей (Яранди и др., 2016 г.).

С другой стороны, существует множество сведений о тесной связи докозагексаеновой кислоты (DHA) и эйкозапентаеновой кислоты (EPA) с функциями головного мозга (Гримм и др., 2016 г.; Хоппертон и др., 2016 г.; Рен и др., 2017 г.). Пл из морского гребешка, использованные в данном исследовании, предположительно содержали относительно большое количество DHA и EPA (Краффе и др., 2004 г.; Ханус и др., 2009 г.). Существует вероятность, что омега-3-полиненасыщенные жирные кислоты могут способствовать улучшению когнитивной функции при БА в лёгкой стадии. Согласно некоторым исследованиям, DHA в форме фосфолипидов проходит через гематоэнцефалический барьер примерно в десять раз более эффективно, чем в форме свободных жирных кислот (Лагард и др., 2001 г., 2015 г.), хотя другие исследования показывают, что диета, богатая омега-3 жирными кислотами, такими как DHA и EPA, оказывает незначительный положительный эффект на когнитивную деятельность пациентов, страдающих БА (Куинн и др., 2010 г.; Филлипс и др., 2015 г.).

Что касается изменения содержания ПлФЭ в крови после лечения, были отмечены значительные различия между лечебной и контрольной группами у пациентов, страдающих БА в лёгкой стадии. Количество ПлФЭ в плазме в контрольной группе значительно уменьшилось после лечения, в то время как в лечебной группе оно не изменилось. Согласно некоторым исследованиям, статины, класс лекарственных средств для снижения уровня холестерина в крови, повышают содержание ПлФЭ в крови (Мейкле и др., 2015 г.). В данном исследовании 23 (23,5%) из 98 пациентов, страдающих БА в лёгкой стадии, принимали статины в течение периода исследования. Тем не менее, значительные различия в уровне ПлФЭ в плазме между лечебной и контрольной группами отмечались и без учёта пациентов, принимающих статины. Данные результаты могут свидетельствовать о том, что выработка Пл в пероксисомах снижалась параллельно с развитием болезни Альцгеймера во время 24-недельного периода лечения и что пероральный приём Пл может способствовать поддержанию выработки Пл в пероксисомах.

Данное исследование имеет несколько проблем и ограничений. Продолжительность исследования может быть недостаточной для определения эффекта Пл на пациентов, страдающих УКН, с оценкой по шкале MMSE-J выше 24, чьё состояние было определено недостаточно точно и могло лишь незначительно отличаться от состояния здоровых людей. Для решения данной проблемы нам необходимо провести дополнительное исследование, чтобы выяснить, возможно ли замедлить переход от УКН к БА при длительном наблюдении за пациентами, страдающими УКН, в лечебной группе. Также требуются дальнейшие рандомизированные контролируемые исследования в отношении пациентов, страдающих БА в средней и тяжёлой стадиях.

Источники финансирования

Данное исследование финансировалось Японским обществом исследования плазмалогена (Pls2014-01) (Фукуока, Япония) в качестве исследования, инициированного исследователем.

Конфликты интересов

ТФ и СМ подали заявку на патент на метод производства фосфолипидов (номер патентной заявки: PCT/JP2015/63617, PCT/JP2015/63740). ТЯ, ТА, ЁЦ, ТВ и СК заявляют, что у них отсутствуют конфликты интересов.

Вклад авторов

ТФ нёс ответственность за централизованное управление исследованием, в том числе за поиск литературы, составление плана исследования, сбор данных, интерпретацию данных и написание рукописи. ТЯ, ТА и ЁЦ участвовали в планировании исследования, отборе персонала и мониторинге исследования. ТВ участвовал в клиническом применении, сборе данных и написании рукописи. СМ участвовал в проведении исследования посредством проведения лабораторных измерений и написания рукописи. СК составлял план исследования, проводил статистический анализ данных и участвовал в написании рукописи. Все авторы проверили рукопись и подтвердили её окончательную версию.

Выражение признательности

Мы благодарим всех пациентов и ухаживающих за ними лиц, принявших участие в данном исследовании. Следующие лица участвовали в проведении испытания в качестве врачей-исследователей: Е. Нисикава (клиника Нисикава-наика, Симоносеки) Х. Фудзино (клиника Фудзино, Янагава), Х. Мацуо (больница Мацуо, Фукуока), Х. Навата (больница Мута, Фукуока), К. Фукуяма (больница Хасами, Нигасисоноги), К. Ирие (больница Хакуйюдзи, Фукуока), К. Саито, Н. Синфуку (клиника BOOCS в Фукуоке, Фукуока), К. Серикава (клиника психических расстройств Моновасуре, Фукуока), К. Такасаки (клиника нейрохирургии Такасаки, Касуя), М. Итимару (клинический комплекс BOOCS, Токио), М. Киносита (больница Нагато, Янагава), М. Мунака (клиника Хаяма, Мунаката), Н. Араки (реабилитационная клиника Сангэндзяя, Токио), С. Оума (больница при университете Фукуоки, Фукуока), С. Накано (клиника Nihonbashi Sakura, Токио), Т. Асада (Olive Clinic Ochanomizu, Токио, Клиника памяти Отяномидзу, Токио), Т. Канеко (больница Канеко, Янагава), Т. Киносита (клиника памяти Нозоми, Митака), Т. Ямада (больница Нисино, Китакюсю, больница Токорозава Меисеи, Токорозава), Т. Ёсимацу (больница Мито, Касуя), Ё. Накаяма (клиника Накаёси, Касуя), Ё. Секине (клиника Секине, Нираката).